Вход / Регистрация
18.11.2024, 07:17
В США нашли быстрый способ создания мутантов
Исследователи из Медицинской школы при Вашингтонском университете нашли быстрый способ создания мутантов. Они добились уменьшения активности ДНК, внедряя в нее короткие последовательности нуклеотидов. Новый метод позволит быстро выяснять функции генов для их дальнейшей модификации.
Для того чтобы понять, что делает определенный ген, ученые выключают (нокаутируют) его и определяют, как это повлияет на организм. Однако этот метод может привести к ранней гибели мутанта, если ДНК кодировала важный для жизни белок. Поэтому ученые заинтересованы в получении гипоморфных мутаций, которые не подавляют, а снижают активность гена.
Однако внесение таких мутаций в клетки организма представляет собой проблему для исследователей. Чтобы выяснить, какие изменения надо ввести в ген, нужно потратить много времени на поиск мутаций, которые не будут его нокаутировать. Кроме того, существующие методы не позволяют точно регулировать уровень экспрессии ДНК (процесса преобразования наследственной информации в белок).
Исследователи разработали новый универсальный способ получения гипоморфных мутаций, которые влияют на синтез белка. Для этого они присоединили к началу гена последовательность из А-нуклеотидов (содержащих аденин). Она вызывает неустойчивость информационной РНК, которая переносит генетическую информацию с ДНК к рибосомам, на которых синтезируется белок.
В своих исследованиях ученые использовали копии гена, который кодирует флуоресцентный полипептид. Они вставили в них последовательности длиной от 9 до 36 адениловых нуклеотидов, полагая, что чем длиннее вставка, тем менее активной будет экспрессия гена. На первом этапе эксперимента модифицированные гены были внедрены в клетки кишечной палочки (Escherichia coli). Затем ученые по интенсивности флуоресценции определяли количество белкового продукта. Выяснилось, что длинные цепочки А-нуклеотидов действительно сильнее тормозили синтез белка.
Такой же результат был получен при внедрении различных генов в одноклеточные эукариоты Tetrahymena thermophila, клетки растений табака Nicotiana benthamiana, культуры раковых клеток человека, а также в плодовых мух Drosophilla melanogaster. Кроме того, ученые показали, что с помощью своего метода они могут регулировать активность функциональных генов, которые кодируют важные для организмов белки. Так, они уменьшили способность E.coli сопротивляться действию антибиотика хлорамфеникола, модифицируя соответствующую ДНК.
Для того чтобы понять, что делает определенный ген, ученые выключают (нокаутируют) его и определяют, как это повлияет на организм. Однако этот метод может привести к ранней гибели мутанта, если ДНК кодировала важный для жизни белок. Поэтому ученые заинтересованы в получении гипоморфных мутаций, которые не подавляют, а снижают активность гена.
Однако внесение таких мутаций в клетки организма представляет собой проблему для исследователей. Чтобы выяснить, какие изменения надо ввести в ген, нужно потратить много времени на поиск мутаций, которые не будут его нокаутировать. Кроме того, существующие методы не позволяют точно регулировать уровень экспрессии ДНК (процесса преобразования наследственной информации в белок).
Исследователи разработали новый универсальный способ получения гипоморфных мутаций, которые влияют на синтез белка. Для этого они присоединили к началу гена последовательность из А-нуклеотидов (содержащих аденин). Она вызывает неустойчивость информационной РНК, которая переносит генетическую информацию с ДНК к рибосомам, на которых синтезируется белок.
В своих исследованиях ученые использовали копии гена, который кодирует флуоресцентный полипептид. Они вставили в них последовательности длиной от 9 до 36 адениловых нуклеотидов, полагая, что чем длиннее вставка, тем менее активной будет экспрессия гена. На первом этапе эксперимента модифицированные гены были внедрены в клетки кишечной палочки (Escherichia coli). Затем ученые по интенсивности флуоресценции определяли количество белкового продукта. Выяснилось, что длинные цепочки А-нуклеотидов действительно сильнее тормозили синтез белка.
Такой же результат был получен при внедрении различных генов в одноклеточные эукариоты Tetrahymena thermophila, клетки растений табака Nicotiana benthamiana, культуры раковых клеток человека, а также в плодовых мух Drosophilla melanogaster. Кроме того, ученые показали, что с помощью своего метода они могут регулировать активность функциональных генов, которые кодируют важные для организмов белки. Так, они уменьшили способность E.coli сопротивляться действию антибиотика хлорамфеникола, модифицируя соответствующую ДНК.
 
Источник: https://lenta.ru